菌种液氮冷冻保藏法

(1)准备安瓿管。用于液氮储存的安瓿管需要能够承受温度的突然变化而不破裂。因此，需要用硼硅酸盐玻璃制成的安瓿管。安瓶管的尺寸通常为7510mm。或者可以容纳1.2mm的液体。 (2)在加入保护剂和杀菌细菌、酵母菌或霉菌孢子等易分散细胞时，将空的安瓿管用棉塞塞好，以1.05kg/cm2温度121.3杀菌15分钟：若为霉菌菌丝体的保存，应在安瓿管中预先加入10%甘油蒸馏水或10%二甲基亚砜蒸馏水等保护剂。 1.05kg/cm2，121.3灭菌15分钟。 (3)插入菌株。用10%甘油蒸馏水制成菌悬液，装入灭菌的安瓿管中；霉菌菌丝可以用灭菌的打孔器从平板上切下来。块被放置在含有防腐剂的安瓿中，然后用火焰密封。通过浸入水中检查是否泄漏。 (4)冷冻然后将密封的安瓿管以每分钟1的缓慢速度冷冻至-30。如果细胞被急剧冷冻，细胞内部会形成冰晶，从而降低存活率。 (5)保存立即将冷冻至-30的安瓿管放入液氮冷冻箱小缸中(图VII-14)，再将小缸放入液氮冷冻箱中。液氮冷冻机内气相为-150，液氮内温度为-196。 (6)当需要对培养保藏的菌种进行恢复时，取出安瓿管，立即放入38-40的水浴中快速解冻，直至完全熔化。再次打开安瓿管，将内容物转移到合适的培养基中。这种方法不仅适用于一般微生物的保鲜，也适用于一些冷冻干燥方法难以保鲜的微生物，如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体和动物细胞等.缺点是需要特殊设备。